凝胶制备及染色注意事项:

1. 先配制分离胶，聚合后再配制夹层胶，最后配制浓缩胶，3种胶的制胶体积比为4:1.5:1。电泳时，30v跑1-2小时后，待指示前沿到达分离胶上沿时，把电压调至100v，至电泳结束，整个电泳过程大约需要6-8小时。

2. 由于多肽所含的氨基酸数目较少，因此如该多肽含有过多的极性氨基酸(碱性或酸性)，则会影响其在SDS-PAGE图上的条带迁移率，即其表观分子量可能和多肽的氨基酸理论推算分子量有一定距离。

3. 由于SDS-PAGE的图谱上，蛋白质对数分子量和迁移率成正比直线关系的分子量范围为15,000-200,000，因此对于分子量小于10000的蛋白质或多肽的分子量，只能根据标准分子量进行估计，推断其是否落入预测的分子量范围。

4. 由于超低分子量多肽（3000及3000以下），极易从凝胶上浸出，因此染色及脱色时间不宜太长，脱色后凝胶也不宜在水中浸泡保存过久，否则条带会消失。

5. 电泳之后可将胶置于固定液中固定20分钟，再进行染色，能得到较好的蛋白条带；如时间不允许，也可不进行固定直接染色。如果使用配方7进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液(货号:P1300)，该产品具有染色快，无毒，灵敏性高等特点，是常规染色液的替代品。

相关产品：

P1015            4×蛋白上样缓冲液（含DTT）

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      A1030            10%过硫酸氨

       T1070            5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液

       P1300            考马斯亮蓝快速染色

附:小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制

1.  49.5% T  3 % C (配制夹层胶和浓缩胶)

丙烯酰胺  48g

甲叉双丙烯酰胺  1.5g

用ddH20溶解后定容至100mL

2.  49. 5% T  6 % C (配制分离胶)

丙烯酰胺 46. 5g

甲叉双丙烯酰胺 3. 0g

用ddH20溶解后定容至100mL

3.  凝胶缓冲液

Tris碱 182g

ddH20   300mL  

用HCl调节pH值至8.45

用ddH20定容至 500mL

再加入SDS  1.5g

4 .  10×阳极缓冲液(下槽缓冲液〕

Tris碱 121.1 g

ddH20  400mL

用HCl调pH值至8.9

用ddH20定容至 500mL

5. 阴极缓冲液(上槽缓冲液)

Tris碱 12 .11g

Tricine 17.92g

SDS 1g

用ddH20定容至1000mL

此溶液不用调节pH值

6. 固定液

0.5% 戊二醛

30% 乙醇

用ddH20定容至100mL

7. 染色液

50% 甲醇

10% 乙酸

0.2% 考马斯亮蓝G-250

用ddH20定容至500mL