全部商品目录
细胞培养常用的消化液
发布时间：2017-02-02 点击次数：523次
一、胰蛋白酶（trypsin）溶液
??? 胰蛋白酶是白色或淡黄色粉末，低温干燥保存。主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞离散。其活性以其消化酪蛋白的能力进行测定。常用1:250（1:500）方法表示，即1份胰蛋白酶可以消化250份（或500份）酪蛋白。
胰蛋白酶对细胞的分离作用与细胞的类型和细胞的性质关系密切。不同细胞系对胰蛋白酶溶液的浓度、温度和作用时间等的要求也不相同。
?
??? 无钙镁离子的平衡盐溶液（常用于配制胰蛋白酶溶液或用于洗涤细胞）
??? NaCl??? 8g
??? KCl??? 0.20g
??? KH2PO4??? 0.02g
??? Na2HPO4??? 0.073g
??? 葡萄糖??? 2.00g
??? 酚红??? 0.02g
??? 溶于1000ml水中
??? 染色体的G带核型实验中胰蛋白酶用生理盐水配制。
???
二、EDTA溶液
??? 又称versene，一般用其钠盐，因可溶性较好。有些组织需要Ca2+、Mg2+来保持其完整性，用EDTA来排除这些离子，可使细胞之间裂解，以分散细胞。其作用比胰蛋白酶缓和。使用浓度为0.02%，以无钙、镁的平衡盐溶液配制。
??? 实验室内常将胰蛋白酶和EDTA联合使用。可提高消化效率，细胞分散情况改善。
EDTA不能被血清抑制，所以消化后必须彻底清洗。
EDTA对成纤维细胞作用差。
?
?
三、胶原酶溶液
??? 1．用Hank's液配制成2000U/ml
??? 2．36.5度搅拌溶解1h，4度过夜
??? 3．滤过消毒
??? 4．分装成等份使用（1-2周内）
??? 5．长时间贮存在-20度
?
四、贴壁细胞——消化法——细胞悬液
??? 1．吸除或倒掉瓶内培养液。
??? 2．以25cm2培养瓶为例，向瓶内加入1ml消化液（胰蛋白酶或与EDTA混合液）轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有细胞表面，然后吸掉或倒掉消化液后再加1ml消化液，轻轻摇动后再倒掉大部分消化液，仅留少许进行消化。也可不采用上述步骤，直接加1-2ml消化液进行消化，但要注意尽量减少消化液的剩余量，因为消化液过多对细胞有损伤，同时也需要较多的含血清培养液去中和。
??? 3．消化最好在37度或室温25度环境下进行。消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察，发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即终止消化。
??? 4．如仅用胰蛋白酶可直接加含血清的培养液，终止消化。
?????? 如用EDTA消化，需加Hank's液数毫升，轻轻转动培养瓶把残留EDTA消化液冲掉，然后再加培养液，这个操作过程要十分小心，如果细胞已经脱壁则消化液不能够倒掉，以免丢失细胞，要加入Hank's液或培养液终止消化，吹打收集细胞悬液，离心漂洗去除EDTA。
??? 5．用弯头吸管，吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞，吹打过程要顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有底部都被吹到。吹打时动作要轻柔不要用力过猛，同时尽量不要出现泡沫，这些都对细胞有损伤。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。
透析袋商城
快递100
Abmart
PeproTech
Bioind
天根
大龙仪器
Eppendorf
Kirgen
肖特
法国科玛嘉
Takara
Toyobo
Qiagen
Biomiga
Omega
Promega
杭州微生物
Biosharp
赛洛捷克
天恩泽
BD
Amresco
Biorad
NEB
Santa Cruz
Genetex
NOVUS
CST
Abcam
Merck Millipore
摩贝网
ChemicalBook
14917-41-0五羟查耳酮
Corning
Thermo Fisher
SPL Life Sciences
麦克林
Sigma Aldrich
来宝网
丁香通
杭州明通科技有限公司
中国食品机械网
中国化工仪器网
